акушерство та гінекологія, урологія, терапія, ендокринологія, ультразвукова діагностика, лабораторна діагностика

Имуноферментний аналіз: принципи і практичні рекомендації по клінічному застосуванню.

ВВЕДЕНИЕ

Метод иммуноферментного анализа (ИФА) основывается на двух принципиальных научных открытиях. Первое заключается в способности энзимов и антител, ковалентно или нековалентно связанных с твердой основой, сохранять свою функциональную активность, т.е. расщеплять субстрат (ферменты) и связывать антигены/антитела; второе базируется на создании комплекса антитело-фермент (Аb-F) в виде конъюгата, сохраняющего свою биологическую активность в растворе. Аb-F-конъюгаты характеризуются высочайшей специфичностью и чувствительностью, достигающей 97-99%. Существует несколько модификаций ИФА: 1. ELISA (enzyme linked immunoadsorbent assay) - метод определения с помощью иммуносорбентов, связанных с ферментами; 2. EIA (enzyme immunoassay) - метод на основе фермент-иммуноопределения; 3. EMIT (enzyme multiplied immunoassay technique) - способ, основанный на связи с ферментами. Первые две модификации (ELISA и EIA) - это методы гетерогенного или твердофазного анализа (тИФА), а третья разновидность (EMIT) является гомогенным ИФА. Метод ИФА незамедлительно нашел свое самое широкое применение в области иммуногистохимии, иммунологии, медицины и ветеринарии. В настоящее время метод тИФА используется для определения широкого класса веществ: гормонов, онкомаркеров, лекарственных препаратов в крови больного (так называемый, мониторинг лекарственных препаратов), наркотиков, бактерий, вирусов и антител против них. Методами ИФА возможно определение иммуноглобулинов (видовая принадлежность, субклассы, специфичность), а также идентификация лимфоцитов (субпопуляций). В настоящее время практическому здравоохранению стал доступен тИФА благодаря своей невысокой стоимости и экологической безопасности, что привело к тому, что данный метод лабораторного исследования перешёл в разряд стандартных, «рутинных» анализов.
Казалось бы, врач получил в свои руки надежный и точный инструмент для безошибочной диагностики и точной оценки эффективности терапии, другими словами – возможность объективизации лечебно-диагностического процесса. Однако, к сожалению, тривиальность толкования (интерпретации) результатов лабораторных исследований не всегда возможна.
Цель данного пособия представить опыт практического использования и правильной интерпретации результатов, полученных методом тИФА.

ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ МЕТОДА тИФА

Определение антител

Рассмотрим принцип определения специфических Ab методом тИФА, суть которого не зависит от биологического субстрата организма, в котором проводят анализ [ 1 ]. На рис. 1а показана общая схема метода, состоящего из трех стадий, соединенных на рисунке знаком плюс. Во время каждой стадии в систему добавляется очередной компонент, инкубируется некоторое время, необходимое для образования иммунного комплекса. Затем ячейка промывается для удаления не связавшихся компонентов. После этого переходят к следующей стадии реакции, которая обозначена следующим знаком плюс на схеме. Рассмотрим подробнее процесс образования иммунного комплекса, который представлен на рис. 1а.
На твердой поверхности пластиковой лунки, изображенной на рисунке слева, сорбирован Ag любого инфекционного агента (фрагмент вируса, бактерии, простейшего и т.п.). В эту лунку вносится исследуемый биологический материал, чаще всего сыворотка крови больного. Если в ней содержатся Ab к инфекционному агенту (на рисунке обведены), то они закрепляются на соответствующих Ag и остаются связанными при промывке. На этом первая стадия заканчивается. Это основная — "специфическая" стадия процесса. Последующие стадии нужны лишь для выявления образовавшегося иммунного комплекса.

На второй стадии анализа в лунку вносят Ab с заранее прикрепленным к ним ферментом, способные связаться с Ab человека, закрепившимися на инфекционном агенте. Это так называемый конъюгат. Если в ячейке имеются образовавшиеся на первой стадии процесса иммунные комплексы, то возникает “молекулярная цепочка”, на конце которой находится фермент.
На следующей стадии в лунку добавляется раствор бесцветного вещества — хромогена. Это вещество приобретает окраску после расщепления его присутствующим в ячейке ферментом

То есть, если все элементы цепочки присутствуют, в лунке образуется окрашенный комплекс (рис. 16). Если на первой стадии анализа иммунных комплексов не образовалось (рис. 1в), то отсутствует и вся последующая часть “молекулярной цепочки”, вследствие чего хромоген не окрашивает раствор. В нашем случае ключевым элементом является специфическое Ab из сыворотки крови больного к инфекционному агенту. По сути, мы анализируем способность некоторых из Ab в исследуемом материале, связаться с интересующим нас Ag.

Рис.1. Определение Ab методом твердофазного иммуноферментного анализа

Хотелось бы особо подчеркнуть, что положительный результат теста показывает только наличие в исследуемом образце (обычно сыворотке крови больного) Ab, способных связываться с поверхностными Ag, сорбированными на твердой фазе. Результат анализа может существенно зависеть от свойств самой тест-системы и от особенностей иммунного ответа больного. Тест-системы на основе моноклональных-Ab позволяют достигать более высокой чувствительности и избирательности. Однако чрезмерно узкая избирательность может приводить к ложноотрицательным результатам при некоторых особенностях иммунного ответа организма больного. Многое зависит от того, какого рода Ag используется для сорбции на твердой фазе. Важна и степень очистки, и количество различных Ag, доступных для образования иммунных комплексов, и многое другое. Разумеется, все сказанное относится к полностью пригодным для использования тест-системам и безошибочному проведению процесса анализа

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИГЕНОВ

Для обнаружения самих инфекционных агентов, а точнее — их Ag, применяется другая модификация метода тИФА, которая представлена на рис. 2а. В этом случае на поверхности планшета (твердой фазе) сорбируются Ab к искомому агенту. Образующаяся в ходе анализа цепочка выглядит так: Ab, инфекционный агент, а далее, как и в предыдущем случае, следует комплекс Ab-F. То есть, если в исследуемом образце присутствует искомый Ag, то образуется иммунный комплекс. В ячейке присутствует фермент, который способен расщеплять хромоген с образованием окрашен-ного продукта (рис. 26). Это возможно только при наличии полной цепочки. Если в исследуемом образце искомый Ag (обведен на рис. 2а) отсутствует, то цепочка не образуется, и окрашивания не происходит (рис. 2в).

Рис.2. Определение Ag методом твердофазного иммуноферментного анализа

 

Ключевым элементом, от которого зависит, сформируется цепочка или нет, является искомый агент, точнее, его Ag, способные связываться с соответствующими Ab диагностической тест-системы.
Так же, как и в предыдущем случае, не следует забывать, что мы определяем только наличие Ag, которые могут быть связаны в такой системе. Например, целую (не разрушенную) бактерию, Ag которой мы ищем, нельзя обнаружить в подобном тесте. Она слишком велика для того, чтобы ее можно было удержать в подобной молекулярной системе. Все особенности, о которых говорилось применительно к предыдущему варианту анализа, сохраняют свою актуальность и в этом случае. Кроме того, имеются дополнительные особенности, обусловленные необходимостью связывания диагностических Ab c различными поверхностными Ag исследуемого объекта.
Все эти особенности необходимо учитывать при анализе результатов, получаемых с помощью ИФА. Только понимание того, что именно на самом деле определяет тест, позволяет правильно трактовать результат. Кроме того, необходимо учитывать динамику изменений этих показателей. Они, в общем, адекватноотражают течение инфекционного процесса, но не всегда синхронны с ним и не во всех деталях совпадают.

ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЙ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИФА-ТЕСТОВ

При инфицировании

В связи с тем, что различные тест-системы дают возможность получить информацию о различных сторонах взаимодействия инфекционного агента и организма человека, возникает вопрос: каким образом значения отдельных показателей связаны с развитием исследуемых процессов. Всегда ли справедлива простая логика — чем ниже показатель, тем лучше?

На рис. 3 схематически показана возможная динамика различных показателей при развитии острого инфекционного процесса. Предположим, что инфекция быстро развивается и заканчивается полным уничтожением инфекционного агента, что отражено на рис. За. Кривая 1 соответствует изменению числа бактерий, кривая 2 — уровню поверхностных Ag, определяемых методом ИФА. На рисунке видно, что эти кривые не совпадают во времени. Увеличение уровня поверхностных Ag может существенно отставать от роста числа бактерий. Некоторое запаздывание этой кривой может объясняться и тем, что чувствительность методов не бесконечно высокая, и ограниченной доступностью инфекционного агента в исследуемом материале, и рядом других причин. Возможно, сказывается то, что тест-системы, как правило, лучше реагируют на антигенноактивные фрагменты, в то время как Ag непосредственно на поверхности живой клетки могут оставаться недоступными для тест-системы. Даже при адекватном заборе материала для лабораторного исследования с соблюдением всех предосторожностей, как правило, отмечается подобного рода несовпадение.
Таким образом, далеко не всегда результат лабораторного теста по определению поверхностного Ag инфекционного агента полностью соответствует содержанию биологически активного инфекционного материала. Результат теста зависит от многих составляющих инфекционного процесса и от конкретной реализации тест-систем. Имеют значение технология получения диагностических Ag и некоторые другие факторы, в том числе описанные выше.
Еще более неоднозначной может быть трактовка результатов теста на наличие Ab к антигенам инфекционного патогена. Часто результаты такого теста могут, в общем, достаточно хорошо описываться известной кривой иммунного ответа на иммунизацию чужеродными Ag (рис.Зб). На рисунке кривая 1 отражает содержание инфекционного агента, кривая 2 — результаты вышеописанных тестов

Отметим две особенности этих кривых. Во-первых, кривая 2, которая, по сути, является кривой иммунного ответа, запаздывает по отношению к кривой, отражающей содержание инфекционного агента. Иногда это бывает очень существенно. Во-вторых, уровень специфичных иммуноглобулинов (Ig) , который собственно и определяется в нашем тесте, может сохраняться высоким и после подавления инфекции. Хотя это и не является абсолютным правилом. Кроме того, при анализе результатов такого теста необходимо помнить о том, какого класса Ig определялись в применявшемся тесте, поскольку при развитии иммунного ответа происходит закономерная смена классов Ig. В типичных случаях Ig класса М (первичный иммунный ответ) сменяются на Ig класса G (вторичный иммунный ответ). Вместе с тем, при реактивации хронической инфекции, “серологический профиль” пациента может имитировать первичный иммунный ответ (рис. 4).

Из всего вышесказанного для практического врача важно следующее. Тесты, определяющие непосредственно уровень Ag в исследуемом материале, более адекватно отражают уровень содержания инфекционного патогена или другого агента, однако результаты анализа сильно зависят от выбора материала для исследования, условий его забора и др. Причем невозможность забора необходимого материала может поставить под вопрос и применимость теста вообще. Особенно важно, что во многих случаях при исследовании наиболее доступного биологического материала, которым является сыворотка крови - такие тесты закономерно дают отрицательные результаты.
Вторая группа тестов, достоинство которых заключено в возможности определения инфекции или опухоли вне зависимости от локализации патологического процесса, основана на выявлении Ab различного класса, а также их субпопуляций к антигенам инфекционного агента, раковой клетки, гормона и т.п. В клиническом понимании эта информация дает сведения о стадии иммунного ответа.

При лечении

Рассмотрим возможные варианты результатов определения Ag и Ab методом тИФА на примере успешного лечения бактериальной инфекции (рис. 5). Начало графика соответствует началу лечения. На рисунке видно, что через некоторое время содержание поверхностных антигенов начинает увеличиваться, иногда значительно. Затем уровень медленно падает до низких значений. Показатели тестов, определяющих содержание Ig, вообще не имеют на начальном этапе лечения четких тенденций. Может наблюдаться как снижение, так и увеличение уровня. Область, в которой могут лежать возможные значения, на рисунке заштрихована. В различных случаях может наблюдаться как увеличение значений, так и их снижение. Причем это зависит не только от применявшегося препарата, но и от других факторов. Хотя можно отметить, что при использовании некоторых препаратов имеется тенденция к снижению данного показателя, в то время как при назначении других – нет.

Необходимо подчеркнуть, что в указанном случае речь идет только об изменении отдельных показателей, полученных определенным методом. Изменение содержания Ag инфекционного агента в исследуемом материале не обязательно коррелирует, а часто — вовсе не совпадает с содержанием патогена в организме пациента.

Уровень специфических Ab к Ag инфекционного агента не отражает состояние общего иммунного статуса, и тем более динамику изменения концентрации специфических Аb нельзя рассматривать в качестве показателя эффективности терапии, т.е. элиминации или сохранения в организме инфекционного агента.
Оценка результатов любых лабораторных исследований должна проводиться врачом с учетом особенностей метода диагностики, своеобразия патогенеза болезни и индивидуальных особенностей конкретного пациента. Таким образом, современные лабораторные технологии предъявили новые требования к квалификации врача и ещё более повысили значимость клинического мышления в понимании результатов лабораторных анализов.

ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Возможности маркерного анализа вирусных гепатитов

В структуре инфекционных заболеваний различные виды вирусных гепатитов занимают одно из ведущих мест. Они заключают в себе значительную клиническую проблему: если вирусы гепатитов А и Е вызывают только острые заболевания, то вирусы В, С и Dявляются причиной как острых, так и хронических форм гепатитов, часто прогрессирующих с развитием циррозов печени и печеночно-клеточного рака.
Необходимо отметить, что различные виды острых и хронических вирусных гепатитов не имеют патогномоничных характеристик клинического течения и гистологической картины поражения печени. Следовательно, полный диагноз вирусного гепатита может быть поставлен только на основании специфических лабораторных тестов.

Используя маркерный анализ, учитывая клинические и эпидемиологические данные, можно решить ряд проблем:
1. установить этиологию вирусных гепатитов А, В, С, D, Е и их ассоциированных форм. При этом следует учитывать, что поскольку при диагностике вирусных гепатитов С и Е зачастую используются диагностические тест-системы для определения маркеров а bНСV и abHEV (антитела класса IgG), то вирусологический диагноз вирусных гепатитов С и Е может быть только предположительным. Для постановки клинического диагноза эти данные маркерной диагностики имеют значение в комплексе с данными клинического обследования, биохимических исследований и эпиданамнеза.
2. Установить стадию болезни.
3. Контролировать ход заболевания и прогнозировать его исход.
4. Осуществлять эпидемиологический анализ и эпидемиологический прогноз.
5. Установить показания для вакцинации и иммунопрофилактики и контролировать их эффективность.
6. Распознавать острые и хронические формы вирусных гепатитов.
7. Определять критерии безопасности крови и ее препаратов.
8. Определять риск вертикальной передачи инфекции от инфицированной матери плоду.

При постановке диагноза вирусного гепатита следует руководствоваться следующими принципами:
• использовать современные представления о клинико-эпидемиологическом значении каждого маркера (таблица 1);
• знать индивидуальные иммунологические профили каждого вида вирусного гепатита;
• использовать данные биохимических исследований (АЛТ, билирубин);
• признание возможности существования ассоциированных форм вирусных гепатитов;
• при невозможности исследовать наличие какого-либо маркера следует учитывать возможность положительного или отрицательного результата, если бы диагностический тест применялся;
• необходимо учитывать возможность получения ложноположительного или ложноотрицательного результата и анализировать их причины (особенно случаи, когда сочетание определяемых маркеров не имеет смыслового значения).

Таблица 1. Клинико-эпидемиологическое значение маркеров вирусов гепатитов A,B,C,D и Е

Маркер Обознач. Клинико-эпидемиологическое значение
Антиген вируса гепатита А HAVAg Обнаружение в фекалиях у детей в очагах инфекции является показателем опасности для окружающих в отношении заражения (но не критерием постановки диагноза
Суммарные антитела к вирусу гепатита А abHAV Показатель перенесенного в прошлом или переносимого в настоящее время вирусного гепатита А и критерий для вакцинации
Антитела класса М к вирусу гепатита А abHAV-IgM Маркер острого вирусного гепатита А
РНК вируса гепатита А RNA-HAV Маркер наличия вируса в исследуемом материале
Поверхностный антиген (s) вируса гепатита В HBsAg Маркер вирусного гепатита В (острого или хронического), требует дополнительных исследований на а bНВс-суммарные, abHBc-IgM). Один из критериев безопасности переливаемой крови или её препаратов. Контроль в группах риска. Выяснение распространенности вируса гепатита В при эпидемиологических исследованиях
Антитела к поверхностному антигену вируса гепатита В abHBs Определение стадии развития гепатита В и прогноза течения заболевания, контроль за уровнем специфического иммунного ответа при определении целесообразности и эффективности вакцинации. Определение распространения вируса гепатита В при эпидемиологических исследованиях. Маркер благоприятного исхода
Сердцевинный антиген (с) вируса гепатита В НВсАg Маркер наличия вируса гепатита В в гепатоците (при остром или хроническом гепатите В)
Антитела к сердцевинному антигену вируса гепатита В (суммарные или класса G) а bНВс Маркер острого или хронического вирусного гепатита В (в комбинации с другими маркерами), носительства вируса гепатита В (в комбинации с другими маркерами), маркер инфицированности вирусом гепатита В в прошлом или настоящем. Контроль донорской крови и её препаратов. Используется в дифференциальной диагностике, определении распространенности вируса гепатита В при эпидемиологических исследованиях
Антитела класса М к сердцевинному антигену вируса гепатита В abHBc-IgM Маркер острого вирусного гепатита В, а также обострения хронического
е-антиген вируса гепатита В (антиген инфекциозности) НВеАg Определение интенсивности репликации вируса гепатита В и степени инфекционной опасности больного. Используется в дифференциальной диагностике вирусных гепатитов, контроле за течением и прогнозировании исхода заболевания. Определение вероятности вертикальной передачи инфекции плоду беременными – носительницами HBsAg. Маркер активной репликации вируса. Маркер инфекциозности крови больного. Маркер неблагоприятного исхода (хронизации) вирусного гепатита В, если он обнаруживается через 2 месяца после начала заболевания
Антитела к е-антигену вируса гепатита В а bНВе Определение стадии заболевания. Дифференциальная диагностика вирусных гепатитов. Маркер благоприятного исхода болезни
ДНК вируса гепатита В DNA-HBV Высокая инфекциозность крови больного. Активная репликация вируса. Дифференциальная диагностика носительства вируса или HBsAg
Антитела к вирусу гепатита С (cуммарные) abHCV Маркер инфицирования вирусом гепатита С. Не позволяет судить о стадии болезни
Антитела к сердцевинному антигену вируса гепатита С класса М abHCc-IgM Маркер острого вирусного гепатита С, но может определяться и при реактивации хронического
РНК вируса гепатита С RNA-HCV Маркер наличия вируса в крови после 10 дня заболевания
Антитела к вирусу гепатита D (суммарные) abHD Маркер инфицирования вирусом гепатита D. Не позволяет судить о стадии болезни
Антитела к вирусу гепатита D класса М abHD-IgM Маркер острого вирусного гепатита D
РНК вируса гепатита D RNA-HDV Маркер наличия вируса в крови
Суммарные антитела к вирусу гепатита Е abHEV Маркер инфицирования вирусом гепатита Е в настоящем или в прошлом. Маркер заболевания

АНТИТЕЛА К ВИРУСУ ГЕРПЕСА 1+2 типов(HSV)

Вирус простого герпеса 1+2 типов может вызывать не только поражения кожи и слизистых оболочек, но и тяжелое поражение ЦНС, глаз и внутренних органов. Внутриутробное инфицирование может привести к поражению ЦНС плода, зрения и слуха, к рождению ребенка с микроцефалией, пороками развития желудочно-кишечного тракта. В 80% случаев внутриутробное заражение заканчивается гибелью плода.

Риск пренатального заражения плода при первичном инфицировании матери составляет около 75%. Защитную роль в предотвращении заражения новорожденного, ограничении формирования латентных форм заболевания играют антитела к вирусу простого герпеса.

Отсутствие признаков заболевания у новорожденного не исключает факта врожденного инфицирования и развития симптомов заболевания в последующие месяцы и годы жизни. Эти обстоятельства диктуют необходимость серологической диагностики этих инфекций у матери во время беременности и у ребенка сразу после рождения.
Реактивация инфекции HSVне может предотвращаться иммунологически, так как распространяется внутри нервных клеток и не вступает в контакт со специфическими антителами в серозной или тканевой жидкости или с иммунокомпетентными клетками. Вирус герпеса распространяется в клетках-мишенях, разрушая их. Это приводит к периодически появляющимся на коже и слизистых оболочках очагах поражения с различной степенью выраженности и активным его выделением.

Существует определенная закономерность в динамике выработки специфических антител к возбудителям инфекции простого герпеса. Через несколько дней после инфицирования на первом этапе формирования иммунитета образуются IgM антитела, уровень которых повышается достаточно быстро и значительно опережает интенсивность образования IgG антител

На втором этапе формирования иммунитета, в более позднее время, начинают формироваться IgG антитела, концентрация которых повышается в течение нескольких недель (5-8) до максимального уровня. К этому времени продукция IgM антител снижается или прекращается совсем. После выздоровления или стабилизации процесса в крови в небольших количествах циркулируют только IgG антитела. Эту закономерность важно учитывать при подозрении на острую инфекцию у женщин с малыми сроками беременности (І-ІІ триместры). В этих случаях обязательно исследование специфических IgM антител, т.к. в начале заболевания, в самом опасном для плода периоде, IgG антитела могут не определяться или выявляться на низком уровне.

АНТИТЕЛА К ЦИТОМЕГАЛОВИРУСУ (ЦМВ)

При первичном инфицировании наиболее важным звеном иммунного ответа является выработка специфических IgМ, уровень которых в это время значительно повышается. В это же время постепенно начинает повышаться и уровень специфических IgG.
В период обострения хронической инфекции концентрация IgМ увеличивается незначительно, но отмечается выраженный подъем концентрации специфических антител класса IgG.
В стадии ремиссии заболевания в крови выявляются незначительно повышенные показатели специфического IgG.
Выявление IgМ к ЦМВ является показателем острой фазы цитомегаловирусной инфекции. Однако положительный результат рекомендуется подтвердить дальнейшими лабораторными исследованиями. Отрицательный результат обычно отражает лишь отсутствие IgМ, не исключая цитомегаловирусную инфекцию или реинфекцию.

АНТИТЕЛА К ВИРУСУ ЭПШТЕЙНА-БАРР

Открытый в 60-х годах вирус герпеса человека 4 типа (ВГЧ-4) или вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ) относится к подсемейству Gammaherpesviridae рода Gymphocryptovirus. ВЭБ поражает в основном два типа клеток: эпителий верхних дыхательных путей и пищеварительного тракта, а также В-лимфоциты, которые в результате инфицирования иммортализуются. Соответственно, ВЭБ вызывает такие различные заболевания, как инфекционный мононуклеоз или злокачественная лимфома Беркитта, злокачественная носоглоточная карцинома.
Заболевание малоконтагиозно за счет наличия большого числа иммунокомпетентных лиц (до 50% детей и 85% взрослых серопозитивны в отношении ВЭБ) и протекания болезни в стертых и атипичных формах.
У людей без дефектов иммунной системы первичное инфицирование ВЭБ может протекать бессимптомно или вызывать субклинические проявления болезни с положительными серологическими реакциями. В дальнейшем вирус может длительное время персистировать в клетках

При массированном поступлении вируса или недостаточности иммунной системы развивается вирусемия, приводящая к острым формам заболевания

Показана возможность трансфузионной передачи ВЭБ от доноров с острой фазой первичной инфекции.
В процессе репликации вируса экспрессируется свыше 70 различных вирусоспецифических белков, однако к настоящему времени выделены группы иммуногенных белков, определение антител к которым дает возможность дифференцировать стадию инфекции.
На рисунке 6 приведены в общем виде серологические профили наличия антител к различным белкам ВЭБ при типичном течении инфекции.

Наиболее специфичными и чувствительными маркерами острой стадии инфекции являются IgM к капсидному комплексу (VGA) и IgG к раннему антигену (ЕА). Лица, переболевшие ВЭБ-инфекцией, завершившейся благоприятной сероконверсией, характеризуюся только наличием IgG к ядерному антигену (EBNA-1). Таким образом, определение серологического профиля дает необходимую и достаточную информацию для постановки диагноза и установления стадии инфекции.

Комплекс этих трех маркеров позволяет с высокой эффективностью по данным серологических исследований диагностировать различные стадии ВЭБ-инфекции. В таблице №2 приведена возможная интерпретация результатов серологических исследований

Табл.2. Интерпретация серологических данных

N п/п   VCA-IgM ЕА-IgG EBNA-IgG
1 Инкубационный период или отсутствие инфицирования - - -
2 Очень ранняя первичная инфекция + - -
3 Ранняя первичная инфекция + + -
4 Поздняя первичная инфекция +/- + +/-
5 Атипичная первичная инфекция + - +
6 Хроническая инфекция -/+ + -
7 Ранняя паст- инфекция   + +
8 Поздняя паст-инфекция - - +
9 Реактивация + + +
10 Атипичная реактивация + - +

АНТИТЕЛА К ВИЧ-ИНФЕКЦИИ

Антитела к ВИЧ-инфекции встречаются у большинства больных СПИД или в состоянии предзаболевания, а также часто обнаруживаются у вирусинфицированных людей в известных группах риска.
Лабораторные методы диагностики ВИЧ-инфекции основаны на идентификации вируса и/или антител к нему. В практической работе используют определение антител к ВИЧ в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа и иммуноблоттинга. Определение антител говорит о зараженности вирусом и эпидемической опасности его носителя.

АНТИТЕЛА К ВИРУСУ КРАСНУХИ

Наиболее часто краснуха встречается в детском и подростковом возрасте. Однако от 20 до 59% женщин детородного возраста не имеют иммунитета к вирусу краснухи , так как не болели краснухой в детском возрасте и являются группой риска по заболеванию во время беременности и инфицированию плода (Torch-инфекция). Заболевание краснухой в течение беременности, особенно в течение первого триместра, может быть причиной серьезных осложнений у плода. Глухота, болезни сердца, микро- и гидроцефалия являются одними из некоторых отличительных признаков синдрома врожденной краснухи.

Табл. 3. Риск внутриутробных поражений при краснухе у беременных представлен в таблице 3:

Срок беременности % риска
внутриутробного заражения
Исходы
0-12 недель 80-90 % 20% - самопроизвольное прерывание беременности, 90% - уродство плода
12-16 недель 50 % 20% - глухота
Более 16 недель 30-35 % Функциональные нарушения различных органов

Новорожденного ребенка с малым весом и имеющего любой из ряда перечисленных симптомов необходимо обследовать на врожденную краснуху путем определения специфических антител класса IgМ.
Специфические антитела против вируса краснухи класса IgМ определяются с 1-3 дня с момента появления первых симптомов заболевания и, в большинстве случаев, с 6 по 9 неделю титр их снижается. Нередко в первые дни болезни IgМ отсутствуют, что связано с коротким инкубационным периодом. Для подтверждения положительного результата рекомендуется параллельно проанализировать образцы, взятые у тех же больных через 7-14 дней. Для интерпретации следует воспользоваться динамикой уровня антител.
Количественное определение антител класса IgG используется для оценки специфического иммунного статуса женщин до и в начале беременности, а также доноров органов и реципиентов.
Уровень антител класса IgGниже 10 Е/мл говорит об отсутствии протективного иммунного ответа, от 10 до 15 Е/мл – слабый защитный иммунитет, выше 15 Е/мл – сильный защитный иммунитет.

ДИАГНОСТИКА БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ

HELICOBACTER PYLORI

Helicobacter рylori – спиральная бактерия, адаптировавшаяся к условиям существования в слизистой желудка.
Выявление специфических антител к H.pylori в сыворотке и слюне пациентов методом ИФА является простым, быстрым и обоснованным подходом при диагностике H.рylori-инфекции и заболеваний, ассоциированных с Helicobacter рylori: хронического гастрита типа В, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. Определение сывороточных антител при помощи ИФА по специфичности и чувствительности почти не уступает эндоскопическому обследованию и дыхательной пробе с мочевиной, к тому же является наиболее щадящим для пациента. К недостаткам метода относится инерционность: результат остается положительным не менее месяца после ликвидации инфекции.

ТУБЕРКУЛЕЗ

Обнаружение в периферической крови специфических антимикобактериальных антител, независимо от выраженности специфического клеточного ответа, является одним из характерных диагностически значимых признаков туберкулеза. Вместе с тем, необходимо иметь в виду, что отсутствие в крови специфических антимикобактериальных антител не является основанием для исключения диагноза туберкулеза, особенно в случаях специфического процесса внелегочной локализации или атипичных микобактерий.
В патологических очагах в органах и тканях местный иммунный ответ наиболее выражен, поэтому целесообразным является поиск антимикобактериальных антител (иногда с применением провокационных туберкулиновых проб) в биологических жидкостях или экстрактах тканей из анатомических зон поражения или максимально приближенных к ним участков (таблица 4) .

Табл.4. Объект поиска антимикобактериальных антител в зависимости от локализации туберкулезного процесса

Локализация специфического поражения Исследуемый биологический материал
Туберкулезно-аллергический синовит Синовиальная жидкость
Лимфаденит Экстракт ткани периферических лимфоузлов
Сальпингоофорит Перитонеальная жидкость Дугласова пространства
Спинальный менингит, развившийся в качестве осложнения туберкулезного спондилита Цереброспинальная жидкость
Очаговый туберкулез легких Жидкость бронхоальвеолярного лаважа, промывные воды бронхов
Экссудативный плеврит Экссудат или транссудат (при неспецифических поражениях)

БОРРЕЛИОЗ (болезнь Лайма)

Боррелиоз – зоонозная инфекционная болезнь,передающаяся через укус клеща, зараженного спирохетой Borrelia burgdorferi. Естественная восприимчивость людей высока, возможна реинфекция. Сезонность заболевания связана с периодом проявления активности клещей, наибольшее число случаев заражения наблюдается в мае-июне и сентябре-октябре.
В начальной стадии наблюдается воспалительная реакция на месте укуса клеща, позднее приводящая к повреждению кожи, а также хроническая мигрирующая эритема. Болезнь связана также с нарушениями сердечной деятельности, неврологическими симптомами и симптомами артрита.


Различают три стадии болезни:

1. хроническая мигрирующая эритема;
2. неврологическая стадия;
3. артроидная стадия.

На ранних стадиях инфекции – на протяжении 1-2 недель (эритема) - концентрация IgM низкая или вообще не выявляется. Со временем титр антител повышается. Наиболее высокие уровни антител обнаруживаются у больных с хроническим артритом.
Отрицательный результат теста не исключает диагноза болезни Лайма. Прием антибиотиков на ранних стадиях заболевания может подавить выработку антител, а у некоторых лиц их концентрация может не достигнуть уровня чувствительности метода

СИФИЛИС

Сифилис – антропонозная венерическая спирохитозная инфекция с контактным механизмом передачи возбудителя. Возбудитель – подвижный спиралевидный микроорганизм Treponema pallidum (бледная трепонема).
Иммуноферментные методы способны дополнить, а порой и заменить существующие рутинные серологические методы диагностики сифилиса

Установлено, что ранние стадии инфицирования характеризуются появлением в крови трепонемоспецифических антител класса М (примерно через две недели после заражения), концентрация которых нарастает и через два месяца достигает своих пиковых значений с последующим снижением уровня до неопределяемых величин.
Антитела класса G появляются в крови только через месяц после инфицирования, однако, уже на 6 неделе после инфицирования их уровень преобладает над уровнем IgM и может сохраняться в таком состоянии годы.
Большое диагностическое значение приобретает выявление антитрепонемных IgM в крови новорожденных. Так как IgM не проходит через плаценту, выявление антитрепонемных IgM-антител у новорожденного указывает на врожденный сифилис. Точно так же IgM-антитела не проникают через гематоэнцефалический барьер, и их появление в спиномозговой жидкости говорит о нейросифилисе.

ДИАГНОСТИКА ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗВАННЫХ ПРОСТЕЙШИМИ И ГЕЛЬМИНТАМИ

ЛЯМБЛИОЗ

Лямблиоз – кишечное заболевание, вызываемое протозойным паразитом Giardia Lamblia .
Острые симптомы лямблиоза могут включать в себя диарею, нарушение всасывания, спазмы кишечника, анорексию, тошноту, потерю веса, общую слабость, зачастую на фоне нормальной температуры тела, продолжающуюся от нескольких недель до нескольких месяцев. Хроническая инфекция может протекать и без острой фазы и часто является следствием безуспешного лечения, приводящего к рецидивам заболевания.
Для диагностики лямблиоза используют определение в кале методом ИФА специфического антигена GSA 65, продуцируемого в больших количествах во время размножения Giardia Lamblia в кишечнике хозяина. GSA 65 является специфическим антигеном Giardia и не обладает перекрестной реактивностью по отношению к другим кишечным паразитам.
В сыворотке крови инвазированных лямблиями людей выявляются антитела к антигенам лямблий, относящиеся к различным классам иммуноглобулинов. Показано, что попадание антигенов лямблий в периферическую кровь увеличивается при резорбции слизистой оболочки кишечника. В связи с этим выявление IgМ к специфическим антигенам лямблий в сыворотке крови может свидетельствовать о наличии острого лямблиоза, диагностика которого возможна на 10-14 день от начала инвазии.

ТОКСОПЛАЗМОЗ

Токсоплазмоз– паразитарное заболевание, характеризующееся полиморфизмом клинических проявлений и значительной вариабельностью течения процесса: от здорового носительства до тяжелых, летальных форм болезни. Поражается в основном нервная система, мышцы, миокард, глаза, увеличивается печень и селезенка.
Для лабораторной диагностики токсоплазмоза используют комплексное определение специфических IgM и IgG .
Наличие IgM-антител к токсоплазме является показателем острого токсоплазмоза. Однако, для подтверждения положительного результата рекомендуются дальнейшие лабораторные исследования.
Отрицательные результаты анализа не исключают возможности ранней стадии заболевания с низкими концентрациями специфических IgM.
Для диагностики недавнего инфицирования рекомендуется проводить два взятия крови у пациента с интервалом три недели – важным признаком недавнего инфицирования является нарастание титра специфических IgG.

ОПИСТОРХОЗ

Описторхозы – гельминтозоонозы, вызываемые различными трематодами, характеризующиеся хроническим течением с преимущест-венным поражением печени, желчного пузыря и поджелудочной железы.
Механизм патологического влияния описторхисов на организм человека складывается, в основном, из трех моментов:
• сенсибилизация организма к антигенам паразита с последующим развитием аллергических реакций;
• воздействие продуктов жизнедеятельности паразита на организм человека;
• повреждение органов и тканей человека в месте обитания паразита.
Описторхоз вызывает значительные изменения в гепатобиллиарной системе, что ведет, в свою очередь, к возникновению различных форм панкреатита, раку печени и поджелудочной железы. В случае интенсивного распада гельминтов могут развиться тяжелые проявления аллергии по типу реакции немедленного типа.
Обнаружение специфических антител подтверждает диагноз описторхоза. Восприимчивость человека высокая. Иммунитет после перенесенного заболевания нестойкий.

ТОКСОКАРОЗ

Токсокароз – заболевание человека, вызываемое миграцией личинок гельминтов, поражающих главным образом представителей псовых (Toxocara canis) и семейства кошачих (Toxocara mystax).
Человек для токсокар не является истинным хозяином, поэтому личинки паразита в его организме не достигают половой зрелости, однако они способны к длительной миграции, поражая различные органы и ткани.
Прижизненный паразитологический диагноз токсокароза практически невозможен, поскольку обнаружить мигрирующие личинки трудно, а идентифицировать их по гистологическим срезам весьма непросто. Ограниченная возможность паразитологической диагностики приводит к тому, что ведущими в диагностике токсокароза являются иммунологические тесты.

ЗАБОЛЕВАНИЯ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

ПАНКРЕАТИЧЕСКАЯ ЭЛАСТАЗА

Перспективным методом оценки тяжести острого панкреатита является определение в крови и кале методом ИФА панкреатической эластазы, концентрация которой изменяется в первые 12 часов от начала заболевания. Данный показатель остается значимым на протяжении нескольких дней даже после единичного приступа острого панкреатита. Панкреатическая эластаза является абсолютно панкреато-специфичной. Заместительная терапия ферментами поджелудочной железы не влияет на определение эластазы.
Панкреатическая эластаза 1 остается неизменной во время кишечного транзита. Таким образом, ее содержание в кале отражает состояние внешнесекреторной функции поджелудочной железы.
Диагностику панкреатической внешнесекреторной недостаточности проводят при хроническом панкреатите, холелитиазе, муковисцидозе, сахарном диабете, папиллярном стенозе, раке поджелудочной железы.
Основными показаниями для назначения определения концентрации панкреатической эластазы в кале являются диагностика или исключение вовлечения поджелудочной железы в случаях:
• абдоминальной боли;
• мальабсорбции;
• посттравматических состояниях;
• других пищеварительных симптомов;
• длительного наблюдения за больными с легкой и умеренной внешнесекреторной недостаточностью поджелудочной железы.

ДИАГНОСТИКА АЛЛЕРГИЧЕСКИХ И ИММУНОПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ

РЕВМАТОИДНЫЙ ФАКТОР

Определение РФ в периферической крови человека методом ИФА используется для обследования пациентов с подозрением на ревматоидный артрит для мониторинга и контроля эффективности проводимых лечебных мероприятий. Установлено, что высокий уровень РФ коррелирует с более тяжелым течением ревматоидного артрита и наличием системных (внесуставных) проявлений.
Учитывая воспалительный характер ревматоидного артрита для мониторинга заболевания и эффективности терапии помимо определения РФ целесообразно количественное определение С-реактивного белка.
Ревматоидный фактор может обнаруживаться в крови человека при:
• хронических гепатитах В и С;
• различных вирусных инфекциях;
• некоторых видах лимфом;
• системной красной волчанке;
• склеродермите;
• саркоидозах.

ИММУНОГЛОБУЛИН Е

IgE отличается от других иммуноглобулинов высокой цитофильностью, т.е. способностью присоединяться к клеткам, в частности к тучным клеткам и базофилам. Присоединение антигена к IgE, находящемуся на этих клетках, приводит к выделению гистамина и других активных субстанций, обеспечивающих развитие реакций гиперчувствительности немедленного типа. Особенностью IgE является неспособностью преципитировать антигены in vitro и фиксировать комплемент при его активации по классическому пути. IgE не способен проникать через плаценту. Определение IgE в клинике является показательным при диагностике различных аллергических состояний. IgE весьма чувствителен к нагреванию и другим денатурирующим воздействиям.

Табл.5. Нормальные показатели IgE в крови

ВОЗРАСТ Концентрация (МЕ/мл)
Новорожденные
До 1 года
От 2 до до 5 лет
От 6 до 9 лет
От 10 до 15 лет
Взрослые: мужчины
женщины
до 1,5
до 15
до 60
до 90
до 200
до 250
до 175

У больных с атоническими аллергиями (например, внешней астмой, сенной лихорадкой или атомической экземой) уровень IgE в крови значительно повышен. Количество IgE увеличено также при многих паразитических заболеваниях. Концентрация IgE зависит от длительности заболевания, поэтому короткие атопические приступы не вызывают ее повышения. Иммуноферментный метод определения IgE является прекрасным вспомогательным средством диагностики атопической аллергии, клинически проявляющейся как астма, частых заболеваний дыхательных путей, хронического ринита или дерматита. Определение IgE является полезным для прогнозирования наследственных аллергических заболеваний у детей.
Повышение уровня IgE происходит при некоторых прогрессирующих опухолях, некоторых случаях агаммаглобулинемии (врожденная сцепленная с полом и обычная форма).

БЕТА-2-МИКРОГЛОБУЛИН

І-2-м обнаруживается на поверхности мембран лимфоцитов, макрофагов, некоторых эпителиальных клеток. І-2-м, как свободный, так и связанный с HLA , в низкой концентрации выявляется во многих биологических жидкостях: в сыворотке крови, моче, слюне, амниотической, цереброспинальной.
В сыворотке крови практически здоровых людей уровень І-2-м составляет 0,8-2,4 мг/л. При этом наблюдается повышение концентрации маркера в связи с несовершенством фильтрационных процессов у новорожденных и стариков.
Повышение концентрации в сыворотке отмечаются при почечных и злокачественных заболеваниях, аутоиммунных нарушениях и хронических воспалительных процессах.
В моче здоровых людей уровень І-2-м составляет 0,02-0,3 мг/л. Более высокие концентрации свидетельствуют о наличии патологического процесса и могут быть связаны с незрелостью канальцев в раннем детстве, физическими нагрузками, ренальной дисфункцией при канальцевых заболеваниях или повреждениях.
В амниотической жидкости наблюдается возрастание уровня І-2-м до 24 недели беременности, после чего отмечается падение его концентрации до 35 недели.
В цереброспинальной жидкости уровень І-2-м изменяется с возрастом следующим образом:

• у новорожденных – 3,0 мг/мл
• 1-3 мес – 2,5 мг/мл
• 3 мес-20 лет – 1,0 мг/мл
• 21 год-60 лет – 1,5 мг/мл
• свыше 60 лет – 2,0 мг/мл.

Повышение уровня І-2-м в цереброспинальной жидкости наблюдается при остром лейкозе и лимфоме с поражением центральной нервной системы, бактериальном (не вирусном) менингите.
В слюне в норме присутствует 0,8 – 2,4 мг/л І-2-м. В слезах нормальный уровень І-2-м в среднем составляет около 14,5 мг/л.


Диагностическое значение:

Уровень І-2-м возрастает при миеломах, неходжинских лимфомах, различных аутоиммунных заболеваниях, нарушениях клеточного иммунитета, почечной недостаточности (поражение почечных канальцев, отторжение почечного трансплантата, хроническое воздействие кадмия). У пациентов с лейкемией повышение уровня І-2-м в цереброспинальной жидкости свидетельствует о вовлечении в патологический процесс центральной нервной системы. Тестирование в сыворотке крови и моче является основным методом диагностики гломерулонефрита и канальцевых нефропатий.

КОМПЛЕКСНЫЕ ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ОНКОЛОГИИ

Лабораторная диагностика злокачественных новообразований основана на морфологическом выявлении злокачественного процеса и изучении молекулярно-биологических изменений, характерных для опухолевого роста.
Значительные достижения теоретической и практической онкологии позволяют использовать ряд биохимических маркеров для диагностики злокачественных образований. Опухолевые маркеры либо продуцируются и секретируются клетками самой опухоли, либо высвобождаются в кровь другими клеточными структурами вследствие системного действия опухоли на организм. Маркеры представлены в основном белками в форме антигенов, ферментов, полипептидных гормонов и другими соединениями.
Для раннего выявления болезни и мониторинга ее течения, контроля за эффективностью лечения и выявления рецидивов в ранние сроки, в настоящее время широко используются иммуноферментные метода анализа, обеспечивающие высокую надежность результата.
Основные опухолевые маркеры и показания к их использованию представлены в таблице 6.
Многолетний опыт в использовании тест-систем по выявлению онкологической патологии показывают, что подтверждение или исключение злокачественного новобразования при обследовании пациента возможен только в сочетании с другими методами диагностики. Кроме того, при диспансерном наблюдении или при проведении массовых профилактических осмотров целесообразно определять не один, а несколько опухолевых маркеров, коррелирующих между собой и позволяющих повышать точность обследования.
При установлении групп повышенного риска необходимо выявить точную локализацию уровня раковых маркеров, те провести комплексные лабораторные исследования обнаруженой опухоли (таблица 7).
В сводных таблицах представлено рациональное использование опухолевых маркеров, показания к назначению определения онкомаркеров, рекомендуемый график их исследования при контроле за лечением и др.

Табл. 6. Показания к применению опухолевых маркеров

Маркер Границы нормы Показания к использованию Примечание
Кальцитонин < 100 пг/мл Медуллярная карцинома
щитовидной железы
Также пригоден для скрининга
групп риска и для диагностики
Раковый антиген
72 - 4 (СА 72-4)
< 3 Ед/мл Карцинома желудка, слизеобразующая карцинома яичника В сочетании с РЭА при карциноме желудка Маркер 2-ой группы выбора при карциноме яичника
І2-Микроглобулин
(І-2-м)
1,2-2,5 мг/л Множественная миелома,
неходжинские лимфомы
Также важен при диагностике заболеваний почек
Антиген плоскоклеточной
карциномы (SCC)
<2,5 нг/мл Мониторинг течения и терапии плоскоклеточной карциномы шейки матки, носоглотки, уха, легких и пищевода Важно: загрязнение элементами
кожи и слюны ведет к завышенным результатам
Фрагмент цитокератина 19
(CYFRA21 - 1)
<3,3 нг/мл Немелкоклеточная карцинома легких Важно: загрязнение элементами
слюны ведет к завышенным
результатам
Раковый антиген
15 - 3 (СА 15-3)
< 28 Ед/мл Мониторинг терапии карциномы молочной железы В сочетании с РЭА
Углеводный антиген 19 - 9
(СА 19-9)
<37 Ед/мл Карцинома поджелудочной железы Маркер 2-ой группы выбора при колоректальных опухолях
Раковый антиген 125
(СА 125)
<35 Ед/мл
(< 65 Ед/мл)
Мониторинг течения и терапии карциномы яичника Дифференцировочный антиген из дериватов целомического эпителия (эпителий Мюллерово-го протока), низкая специфичность
Нейрон-специфическая
енолаза (НСЕ)
< 12,5 нг/мл Мелкоклеточная карцинома легких, нейробластома, апудома (например, инсулино-ма, феохромоцитома, карциноидные опухоли) В сочетании с РЭА при мелкоклеточной карциноме легких
Хорионический гонадотропин человека (ХГ) Мужчины
0-5 МЕд/мл
Несеминоматозные герминомы (48 - 86%); хорионкарциномы яичка или плаценты (100%); хорионаденома (97%); семиномы (комбинированные опухоли) (7- 14%)  
Тканевой полипептидный
антиген (ТРА)
< 80 Ед/л Карцинома мочевого пузыря Значение > 80: карцинома мочевого
пузыря, бронхов, яичника, желудка, возможны заболевания печени, почек, легких и др Специфичность низкая
Раковый эмбриональный
антиген (РЭА)
<3 нг/мл Мониторинг течения и терапии
карцином: колоректальной,
бронхиальной и желудочной
5% курильщиков имеют уровень
маркера 2,5 - 5 нг/мл; 3% -
5-10 нг/мл; 1% - 10-20 нг/мл
±-Фетопротеин (АФП) < 15 нг/мл Мониторинг беременности, диагностика и мониторинг течения и терапии первичной гепатоцеллюлярной карциномы и
гермином
Преходящие повышения уровня АФП при заболеваниях печени
Простата -специфический
антиген (PSA)
<3,7 нг/мл Карцинома простаты Тканеспецифический, но
опухоленеспецифический При
карциноме простаты, как правило,
уровень выше 10 нг/мл

Табл. 7. Рекомендуемые лабораторные тесты при обследовании больных группы повышенного риска возникновения онкологических заболеваний

Локализация опухоли (обнаруженной или предполагаемой) Лабораторные тесты
Печень, поджелудочная железа АФП, РЭА, СА 19-9, ЛДГ, ЛДГ5, ЩФ, ГГТФ, ферритин, эластаза, паратиреоидный гормон
Желудок, тонкая, толстая, прямая кишка РЭА, СА 19-9, ЛДГ5, серотонин
Яичник, матка РЭА, СА 125, І-2-М, АФП, ХГ
Молочная железа РЭА, МСА, ферритнн, ЛДГ, ЛДГ5, амилаза, АКТГ
Яичко АФП, ХГ, РЭА, ЛДГ, ЛДГ5
Легкие РЭА, НСЕ, СА 19-9, І-2-M, ферритин, ЛДГ1, ЛДГ2, АКТГ, кортизол, паратиреоидный гормон
Предстательная железа Кислая фосфатаза (простатический изофермент), РЭА, PSA
Гемобластозы РЭА, І-2-М, ферритин, общий анализ крови, миелограмма, цитохимическая реакция форменных элементов крови, белок Бенс-Джонса в моче, иммуноглобулины, определение парапротеинов в крови и моче

Табл. 8. Рациональное использование опухолевых маркеров при опухолях легких и носоглотки

Маркер
Опухоль
РЭА НСЕ SCC CYFRA 21-1
Легкие (мелкоклеточная карцинома )   +++   ++
Легкие (немелкоклеточная карцинома) +     +++
Носоглотка +   +++  

Примечание: количество (+) отражает степень важности маркера


Табл. 9. Рациональное использование опухолевых маркеров
при опухолях желудочно-кишечного тракта

Маркер РЭА АФП СА 19-9 СА 72-4 SCC
Опухоль
Толстый кишечник +++   ++    
Поджелудочная железа +   +++    
Желудок ++   + +++  
Пищевод +       +
Печень (ГЦК)   +++      
Билиарные протоки     +++    

Примечание: количество (+) отражает степень важности маркера

Табл. 10. Рациональное использование опухолевых маркеров
при опухолях репродуктивных органов и тканей

маркер
опухоль
РЭА СА 19-9 СА 72-4 СА 125 СА 15-3 SCC ХГЧ
Яичники     ++ +++      
Молочная железа +++       +++    
Шейка матки ++ + +++     +++  
Хорион             +++

Примечание: количество (+) отражает степень важности маркера

Табл. 11. Рекомендуемый график исследования опухолевых маркеров
для контроля за лечением (мониторинг)

Локализация рака Опухолевый
маркер
Предоперационый период 1-й год после операции 2-й год после
операции
3-й год после
операции
Молочная железа МСА, РЭА один раз каждый курс терапии, затем ежеквартально ежеквартально дважды в год, затем 1 раз в год после 5 лет
Легкие НСЕ - « - - « - - « - 2 раза в год
РЭА - « - - « - - « - 2 раза в год
Ободочная и прямая кишка РЭА +
СА 19-9
- « - после операции, затем ежеквартально - « - 2 раза в 3-й год, затем 1 раз в год
Поджелудочная железа, желчный пузырь, желчные протоки СА 19-9 - « - ежемесячно 6 месяцев, затем ежеквартально - « - 2 раза в год
Печень АФП - « - - « - - « - - « -
Желудок СА 19-9 или РЭА - « - каждый курс терапии, затем ежеквартально - « - 2 раза в 3-й год, затем 1 раз в год
Яичко АФП + ХГ - « - ежедневно 1-ю неделю, затем ежемесячно - « - 2 раза в год
Матка РЭА один раз сразу после лечения, затем ежеквартально ежеквартально 2 раза в 3-й год, затем 1 раз в год
Яичники РЭА, СА 125 АФП или ХГ - « - каждый курс терапии, затем ежеквартально - « - 2 раза в год
Щитовидная железа РЭА - « - после операции, затем ежеквартально - « - 2 раза в 3-й год, затем 1 раз в год

Примечание: Маркеры переопределяются в пределах одного месяца, когда бы они не начали повышаться Быстро прогрессирующие карциномы требуют более частого определения

Табл. 12. Клиническое использование опухолевых маркеров

Локализация рака Гистологический тип Опухолевый маркер Диагноз Стадия Прогноз Мониторинг
Молочная железа Аденокарцинома РЭА + ++ ++ +++
МСА + + +++ +++
Легкие Мелкоклеточный рак легкого НСЕ ++ ++ +++ +++
Аденокарцинома и малые клеточные карциномы РЭА + + ++ +++
РЭА+СА19-9 + + + +++
Ободочная
и прямая кишка
Аденокарцинома РЭА ++ ++ +++ +++
Печень Гепатоцеллюлярная карцинома АФП +++ - - +++
Метастазы из первичной опухоли РЭА ++ - + +++
Желудок Аденокарцинома С А- 19- 9 ++ - - +++
РЭА - - - ++
Поджелудочная железа Аденокарцинома СА 19-9 +++ - - +++
РЭА + - + ++
Яичко Несеминома АФП и/или ХГ +++ ++ +++ +++
Семинома ХГ +++ ++ +++ +++
Матка Аденокарцинома РЭА - - - ++
Хорионкарцинома ХГ +++

+++

+++ +++
Яичник Слизистые опухоли РЭА - - - +++
Эпителиальные опухоли кроме слизистых СА 125 - ++ - +++
Эмбриональная клеточная опухоль АФП и/или ХГ +++ - - +++
Щитовидная
железа
Медуллярная карцинома РЭА +
кальцитонин
+++ ++ ++ +++
Предстательная железа Аденокарцинома Кислая
фосфатаза
(простатический изофермент)+
PSA
++ +++

+++

+++

Примечание: + - полезный, ++ - важный, +++ - очень важный

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Широкое внедрение в клиническую практику иммунохимических методов лабораторной диагностики требует от врачей и лаборантов высококвалифицированной подготовки.
Задача данного практического руководства состоит в совершенствовании практических навыков врача при работе (клинической оценке) с результатами исследований, проведенных методами ИФА.
С этой целью был проделан анализ научной и клинической литературы, а также представлен собственный опыт применения методов ИФА в различных областях биологии и медицины. Наш труд не претендует на исчерпывающие ответы по причине поистине безграничных возможностей метода ИФА и стремительного прогресса в данной области науки.
Настоящие практические рекомендации предназначены для широкого круга врачей (терапевтов, инфекционистов, лаборантов и т.п.), а также врачей-интернов и студентов медико-биологических ВУЗов.